单细胞四重巢式荧光聚合酶链反应进行血友病A基因诊断和性别鉴定的研究

摘要

目的建立快速有效检测血友病 A 基因诊断和性别鉴定的单细胞聚合酶链反应（PCR）方法。方法联合6个与凝血因子Ⅷ（FⅧ）紧密连锁的 STR 位点（DXS15、DXS9901、G6PD、DXS1073、DXS1108和 F8Civs13）通过多重荧光 PCR 进行正常人群多态性分析和血友病 A 家系基因诊断,从中选取杂合度和诊断率较高的 STR 位点联合性别位点牙釉蛋白基因（Amelogenin gene）建立单淋巴细胞多重巢式荧光 PCR 的检测方法。结果选择了3个杂合度和诊断率较高的 STR 位点（FSCivs13、DXS1073和 DXS15）联合性别位点建立了单细胞四重巢式荧光 PCR 的检测方法。Amelogenin、DXS15、F8Civs13和 DXS1073在男性的单细胞扩增成功率分别为94.3%、91.4%、100%和100%,在女性为100%、97.1%、97.1%和97.1%。该女性的 DXS1073和 DXS15位点呈杂合子,均未发现等位基因脱失现象。扩增皆未发现假阳性和假阴性的情况。结论建立的单细胞四重巢式荧光PCR 方法快速有效,有望应用于临床血友病 A 非创伤性产前基因诊断。