生物素-链霉亲和素ELISA检测血清CTGF方法的建立及其初步应用

摘要

目的建立生物素-链霉亲和素ELISA检测血清CTGF的方法 （简称"系统ELISA血清CTGF法"）,初步评估CTGF在诊断慢性肝炎（CHB）患者肝纤维化的临床价值。方法用生物素化抗CTGF单克隆抗体和多克隆抗体建立生物素-链霉亲和素ELISA方法 ,测定CHB患者血清CTGF水平。264例CHB患者根据肝穿刺病理诊断结果分为无或轻度肝纤维化组（S0～S1,108例）和明显纤维化组（S2～S4,156例）。用ROC曲线分析CTGF诊断CHB纤维化的敏感度、特异度及符合率,并与肝纤维化标志物HA、PCⅢ、CⅣ、LN、APRI比较;多组问比较用方差分析和秩和检验,多个样本间的两两比较分别采用t检验或Mann-Whitney U检验,不同肝纤维化分期比较采用Spearman相关分析。结果自建系统ELISA血清CTGF法测定CTGF的灵敏度为0.2μg/L,检测范围为0～64μg/L。用该法检测高、低浓度2份不同CTGF标准品的批内CV分别为4.5%、9.8%;批间CV分别为10.1%、12.8%。S0/S1组、S2～S4组CTGF血清浓度分别为6.7（3.1～10.1）、16.1（11.8～27.2）μg/L,两组间差异有统计学意义（U=1 217,P＜0.001）;且与肝纤维化分期明显相关（r=0.689,P＜0.001）。其区分CHB明显纤维化和轻度纤维化的ROC曲线下面积（AUC）为0.841（95%CI:0.762～0.920）,CTGF在临界值为10.3μg/L时,其敏感度、特异度分别为70.5%、82.4%。CTGF平行联合APRI诊断CHB肝纤维化的敏感度为96.1%,高于单项HA（75.6%）、PCⅢ（70.5%）、CⅣ（63.6%）、LN（79.5%）、APRI（86.3%）。其特异度为65.5%,低于单项HA（72.5%）、PCⅢ（76.5%）、CⅣ（78.4%）;CTGF系列联合PCⅢ的特异度为95.9%,高于单项HA、PCⅢ、CⅣ、LN（64.7%）、APRI（66.1%）,但其敏感度为67.7%,低于单项HA、PCⅢ、LN（64.7%）、APRI（66.1%）的敏感度。结论建立的系统ELISA血清CTGF法具有较高的敏感度、特异度和灵敏度。血清CTGF与肝纤维化分期明显相关,血清CTGF可能是预测肝纤维化分期一个较好的指标,CTGF平行联合APRI可用于CHB纤维化的筛查,CTGF系列联合可作为CHB纤维化的诊断指标。