国人胃癌蛋白质组分析中双向凝胶电泳技术建立及优化

摘要

目的初步建立、优化用于胃癌蛋白质组研究的双向凝胶电泳技术和计算机图像分析技术,提高其分辨率及重复性,得到一种分析胃癌蛋白质组双向凝胶电泳新方法.方法提取胃癌组织中蛋白质,对以固相pH梯度为第一向双向电泳的关键因素与环节,如样品处理、电泳参数和凝胶浓度进行一系列优化.进一步采用双向凝胶电泳分离胃癌组和正常组总蛋白质,银染显色、图像分析软件分析电泳图谱.结果重复性实验结果显示同组样品在3次不同实验中所得蛋白质斑点数目相对标准差(变异系数平均值%):胃癌组和正常组分别为23.00±10.11、20.33±9.90.变异系数范围(%):胃癌组和正常组分别为3.80～60.10、2.70～56.89.同一蛋白质斑点在3次实验中等电点、分子量的相对标准差分别为8.76%±5.14%,13.00%±4.22%和10.84%±9.16%.获得了较好的分辨率和重复性的双向凝胶电泳图谱.结论蛋白质组双向电泳的建立及优化表明适合于胃癌蛋白质组差异表达研究.