基于TGF-β_(1)/Smad3信号通路探讨参附注射液对缺血性脑卒中大鼠的神经保护作用

摘要

目的 基于转化生长因子β_(1)(TGF-β_(1))/Smad家族成员3(Smad3)信号通路探讨参附注射液对缺血性脑卒中(IS)大鼠的神经保护作用机制。方法 将48只无特定病原体(SPF)级SD雄性大鼠随机分为Sham组、Vehicle组、参附注射液组、TGF-β_(1)组。采用改良Longa线栓法构建Vehicle组、参附注射液组、TGF-β_(1)组大鼠永久性中动脉栓塞模型,分别腹腔注射相应剂量的生理盐水、参附注射液和TGF-β_(1),Sham组只插入线栓不结扎其余操作同Vehicle组。建模14 d后进行神经功能缺损评分;采用激光散斑成像观察大鼠大脑皮层血流变化;伊文思蓝染色检测血脑屏障通透性;2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)染色检测脑梗死面积;尼氏染色观察脑组织神经元损伤程度;原位末端凋亡检测(TUNEL)法检测细胞凋亡;检测白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平;蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测TGF-β_(1)、p-Smad3、B细胞淋巴瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达。结果 与Sham组比较,Vehicle组大鼠大脑皮层血流灌注量、SOD水平、Bcl-2蛋白水平减少,神经功能损伤评分、脑梗死面积、血脑屏障通透性、细胞凋亡、神经元损伤、炎性因子IL-1β、IL-6、TNF-α含量、MDA水平及TGF-β_(1)、p-Smad3水平、Bax蛋白水平增加(P<0.05);与Vehicle组比较,参附注射液组和TGF-β_(1)组大鼠大脑皮层血流灌注量、SOD水平、TGF-β_(1)、p-Smad3水平、Bcl-2蛋白水平增加,神经功能损伤评分、脑梗死面积、血脑屏障通透性、细胞凋亡、神经元损伤、炎性因子IL-1β、IL-6、TNF-α表达、MDA水平、Bax蛋白水平降低(P<0.05)。结论 参附注射液可改善脑缺血大鼠血流灌注,缩小脑梗死体积,抑制机体氧化应激、炎症反应及细胞凋亡,可能通过激活TGF-β_(1)/Smad3信号通路发挥对IS大鼠神经细胞的保护作用。