抑制性RNA对细胞内HCV IRES介导HCV核心蛋白表达抑制作用的定量分析

摘要

目的定量观察核糖体内部进入位点(Internal ribosome entry site,IRES)特异性抑制性RNA(inhibitor RNA,IRNA)对细胞内HCV IRES介导的HCV C基因表达的抑制作用.方法构建IRES特异性IRNA的真核表达载体(pcRz-IRNA),将该质粒与pcHCVcluc(含HCV 5′非编码区、核心区与荧光素酶基因)共转染人肝细胞癌(HHCC)细胞株,对转染后72 h细胞表达HCV C抗原进行间接免疫荧光染色,用激光共聚焦显微镜对其含量进行定量分析.用荧光素酶检测试剂盒对其活性进行检测.结果共转染细胞可表达HCV C抗原,同对照组相比,IRNA组荧光量明显下降.结论在IRNA与HCV共转染细胞中,IRNA对HCV IRES介导蛋白翻译具抑制作用.