miR-1294靶向TRIM28调控葡萄膜黑色素瘤细胞增殖、迁移和侵袭的分子机制

摘要

目的:探讨微小RNA-1294(miR-1294)对葡萄膜黑色素瘤细胞增殖、迁移、侵袭的影响及其机制.方法:采用qRT-PCR与Western blot分别检测葡萄膜黑色素瘤组织、癌旁组织、葡萄膜黑色素瘤细胞系与正常葡萄膜上皮细胞系中miR-1294、三结构域蛋白28(TRIM28)的表达.葡萄膜黑色素瘤SP6.5细胞作为研究对象,在细胞中分别转染miR-NC、miR-1294 mimics、si-NC、si-TRIM28,分别记作miR-NC组、miR-1294组、si-NC组、si-TRIM28组;miR-1294 mimics、pcDNA、miR-1294 mim?ics与pcDNA-TRIM28分别共转染至SP6.5细胞,分别记作miR-1294+pcDNA组、miR-1294+pcDNA-TRIM28组.MTT法检测细胞增殖情况;Transwell小室实验检测细胞迁移及侵袭.StarBase预测miR-1294的靶基因,双荧光素酶报告实验鉴定靶基因,Western blot法检测靶基因的蛋白表达.Western blot法检测细胞周期蛋白1(CyclinD1)、p21、p27、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、基质金属蛋白酶-14(MMP-14)的蛋白表达.结果:miR-1294在葡萄膜黑色素瘤组织及其细胞系中的表达水平明显降低(P<0.05),TRIM28在葡萄膜黑色素瘤组织及其细胞系中的表达水平明显升高(P<0.05);miR-NC组、miR-1294组间细胞活力、迁移细胞数目与侵袭细胞数目总体比较,差异均有统计学意义(P<0.05),其中miR-1294组较miR-NC组细胞活力降低,迁移细胞数目与侵袭细胞数目减少,CyclinD1、MMP-2、MMP-9、MMP-14蛋白表达水平降低,p21、p27蛋白表达水平升高;与si-NC组比较,si-TRIM28组细胞活力降低(P<0.05),迁移细胞数目与侵袭细胞数目减少(P<0.05),CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白表达水平降低(P<0.05),p21蛋白表达水平升高(P<0.05).双荧光素酶报告实验结果显示TRIM28为miR-1294的靶基因.TRIM28过表达可逆转miR-1294过表达对葡萄膜黑色素瘤细胞增殖、迁移、侵袭的抑制作用.结论:miR-1294可抑制靶基因TRIM28的表达从而抑制葡萄膜黑色素瘤细胞增殖、迁移及侵袭.