淫羊藿苷调控Wnt/β-catenin信号通路干预大鼠MSCs成脂成骨双向分化实验研究

摘要

cqvip:目的:探讨不同浓度的淫羊藿苷对体外培养的骨质疏松大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)成脂与成骨双向分化的作用及其机制。方法:运用全骨髓贴壁法分离纯化和培养Sprague Dawley大鼠MSCs,免疫荧光检测MSCsy阳性标志CD44和CD90;CCK-8检测不同浓度淫羊藿苷对MSCs细胞增殖作用影响;观察不同浓度淫羊藿苷对MSCs成脂和成骨分化的影响;qRT-PCR和Western blot检测给药前后MSCs内成脂特异性基因PPARγ、Adipsin和FABP4以及成骨特异性基因RUNX2、ALP和OPN的变化。Western blot检测淫羊藿苷刺激对Wnt/β-catenin通路激活的影响。结果:免疫荧光结果显示MSCs阳性标志CD44和CD90均表现出红色荧光遍布胞质;CCK-8检测结果显示10、20、30和40 ng/ml淫羊藿苷在1~4 d对MSCs增殖均无影响,50 ng/ml淫羊藿苷在第3~4 d时明显抑制MSCs增殖(P<0.05);与空白对照组相比,10 ng/ml淫羊藿苷能抑制MSCs向成脂方向分化,同时显著下调成脂特异性基因PPARγ、Adipsin和FABP4的表达(P<0.05),而40 ng/ml淫羊藿苷作用则与之相反;10 ng/ml淫羊藿苷能促进MSCs向成骨方向分化,同时显著上调成骨特异性基因RUNX2、ALP和OPN的表达以及OC的活性,而40 ng/ml淫羊藿苷作用则与之相反。10 ng/ml和40 ng/ml淫羊藿苷均显著上调Wnt/β-catenin信号通路β-catenin和Wnt7(P<0.05)表达,同时下调GSK-3β的表达(P<0.05)。结论:不同浓度的淫羊藿苷通过激活Wnt/β-catenin信号通路促进RUNX2、ALP和OPN的表达或者抑制PPARγ、Adipsin和FABP4的表达从而促进大鼠MSCs成骨分化,抑制其成脂分化作用。