人幽门螺杆菌外膜蛋白18000 DNA疫苗的构建及表达

摘要

目的:构建含人幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)18 000外膜蛋白编码基因的真核重组载体,并在COS-7细胞中表达,为核酸疫苗的开发奠定基础.方法:从原核表达质粒pET32a(+)/528中,酶切H.pylori 18000外膜蛋白编码基因片段,将目的基因与同样进行酶切、纯化的载体pcDNA3.1进行连接,而后转化并筛选含有目的基因的重组载体pcDNA3.1/528,并在COS-7细胞中表达,以RT-PCR,Western法检测其表达产物.结果:经单、双酶切证实插入的基因片段为H.pylori 18000外膜蛋白编码基因;采用RT-PCR方法,能够从转染的COS-7细胞中扩增出一条与目的基因大小一致的DNA片段,Western法等检测显示,该重组质粒能够在COS-7细胞中表达目的蛋白,而且具有生物活性.结论:成功地构建了核酸疫苗pcDNA3.1/528,并在COS-7细胞中表达,为H.pylori核酸疫苗的研制奠定了良好的基础.