人β2-微球蛋白在pET-22b(+)表达载体中的克隆、表达与纯化

摘要

目的:构建人β2-microglobulin(β2-M)基因的原核表达载体,在大肠杆菌中高效表达β2-M蛋白质并进行纯化,为构建MHC-肽四聚体奠定基础.方法:从人外周血单核细胞中提取总RNA,采用RT-PCR技术扩增出去除信号肽部分的β2-M基因,克隆pET-22b(+)表达载体进行诱导表达.采用离子交换层析和凝胶过滤方法对表达产物进行纯化,用ELISA和Western blot法进行免疫学鉴定.结果:成功地构建了表达载体pET-22b(+)-β2-M,对表达产物进行了纯化,并对表达产物进行了鉴定.结论:获得β2-M蛋白的高效表达,为进一步利用亲和素在体外构建MHC-Ⅰ类分子肽四聚体奠定了基础.