shRNA表达质粒抑制耐阿霉素的人乳腺癌细胞株(MCF-7/AdrR)绿色荧光蛋白表达的研究

摘要

目的:探讨靶向增强型绿色荧光蛋白(EGFP)小发夹结构RNA(Short hairpin RNA,shRNA)对耐阿霉素的人乳腺癌细胞(MCF-7/AdrR)中EGFP基因表达的抑制作用.方法:构建针对EGFP基因的shRNA表达载体,与pcDNA3.0 EGFP质粒共转染MCF-7/AdrR细胞,分别用激光共聚焦扫描显微镜(Laser confocal scanning microscope, LCSM)和流式细胞术检测干扰效果.结果:瞬时共转染pSilencerTM 3.1-H1 neo EGFP shRNA质粒和pcDNA3.0 EGFP质粒后,荧光显微镜观察结果显示MCF-7/AdrR细胞中发出荧光的细胞数量减少,荧光强度明显降低.流式细胞术检测阳性细胞百分率降低至35.6%,差异有显著性.结论:靶向EGFP 的shRNA表达质粒能有效而特异抑制EGFP在MCF-7/AdrR中的表达,MCF-7/AdrR细胞中存在RNA干扰现象,为进一步利用RNA干扰技术逆转乳腺癌多药耐药性的研究奠定基础.