实验性变态反应性脑脊髓炎AQP-4、CD4+CD25+调节性T细胞研究

摘要

目的:以髓鞘少突胶质细胞糖蛋白细胞外免疫球蛋白样结构域(MOGIgd)为抗原免疫C57BL/6小鼠,建立EAE模型,并检测AQP-4、CD4+CD25+T细胞的表达水平.方法:①采用分子克隆技术诱导表达MOGIgd-TrxA 融合蛋白,纯化后以此融合蛋白为抗原于侧腹壁皮下多点注射免疫C57BL/6小鼠作为实验组(MOG组);同时以硫氧还蛋白(TrxA)、豚鼠脊髓匀浆(GPSCH)免疫小鼠分别作为阴性、阳性组.评估动物的临床神经功能、组织病理情况,评价模型的质量.②免疫组化法、荧光定量PCR技术测定AQP-4表达水平;经流式细胞仪(FACS)检测小鼠脾脏中CD4+CD25+调节性T细胞.结果:①MOG组及GPSCH组小鼠均呈慢性非缓解型病程,两组在发病时间、达峰时间、临床神经功能评分等方面差异无统计学意义(P＞0.05).TrxA组无一动物发病.模型组(包括MOG组和GPSCH组)动物HE染色可见血管周围炎性细胞浸润,胶质结节形成,髓鞘染色可见斑片状髓鞘脱失,大脑、小脑、脑干和脊髓均有不同程度受累.免疫组化定性和半定量分析显示MOG组和GPSCH组病灶周围炎症浸润处AQP-4表达与TrxA组相比明显增高(P＜0.05);②MOG组CD4+CD25+T细胞占CD4+ T 细胞比例为(4.71±1.61)%,GPSCH 组为(1.44±0.65)%,均明显低于TrxA组(P＜0.01),且MOG组和GPSCH 组之间的差异亦具有统计学意义(P＜0.01).结论:用MOGIgd免疫C57BL/6小鼠诱导EAE模型稳定,发病率高,为今后进一步研究MS的免疫发病机制和采取有效治疗措施打下基础.EAE模型动物AQP-4的表达量与炎症浸润的严重程度相关.