携带tPA信号肽序列HuZP3核心抗原核酸疫苗质粒的构建与体外瞬时表达

摘要

目的:构建含有组织型纤溶酶原激活剂(tPA)信号肽的人卵透明带3(HuZP3)蛋白核心抗原核酸疫苗质粒并进行体外瞬时表达.方法:将HuZP3基因用PCR方法扩增并分别引入限制性内切酶酶切位点,然后克隆入pIRESIneo载体中获得核酸疫苗质粒,经筛选鉴定后,将上述核酸疫苗质粒及空载体质粒pIRESIneo分别用脂质体瞬时转染CHO细胞,应用免疫印迹法检测核心抗原在体外CHO细胞中的表达,并将其免疫实验小鼠,以酶联免疫吸附法验证其免疫原性.结果:成功构建以pIRESIneo为载体的含tPA 信号肽的HuZP3核心抗原核酸疫苗质粒,体外瞬时表达证实含tPA信号肽的HuZP3核心抗原在CHO细胞胞内和胞外均能表达,含tPA信号肽的HuZP3核心抗原核酸疫苗质粒的核心抗原表达水平较高,核酸疫苗质粒具有很好的免疫原性.结论:以pIRESIneo为载体的含tPA信号肽的HuZP3核心抗原核酸疫苗能够将细胞内的HuZP3核心抗原分泌到细胞外,构建的核酸疫苗质粒pIRES1-ZP3/tPA具有很好的免疫原性,为进一步研究其免疫原性奠定了基础.