miR-203靶向调节PEG3/NF-κB信号通路对糖尿病肾病大鼠肾纤维化的影响

摘要

目的：探究微小RNA-203（miR-203）对父本表达基因3（PEG3）/核转录因子-κB（NF-κB）信号通路的靶向调控作用及其对糖尿病肾病（DN）大鼠肾纤维化的影响。方法：建立大鼠DN模型，高糖培养大鼠肾小管上皮细胞（NRK-52E）模拟体外DN模型，qRT-PCR检测miR-203表达水平，Western blot检测PEG3、NF-κB蛋白表达。双荧光素酶报告基因技术检测miR-203与PEG3的靶向关系。构建miR-203模拟物（miR-203 mimic）及阴性对照（mimic NC）,PEG3高表达重组载体（pcDNAPEG3）及阴性对照（pcDNA-NC），分别注射及转染至DN大鼠及DN模型细胞中，设置为：对照组、模型组、miR-203 mimic组、mimic NC组、miR-203 mimic+pcDNA-PEG3组、miR-203 mimic+pcDNA-NC组。检测大鼠24 h尿蛋白、血糖、血清肌酸酐（SCr）和尿素氮（BUN），电镜及Masson染色检测肾组织病变及纤维化变化；ELISA检测细胞中IL-6、IL-1β、Ⅰ型胶原（CollagenⅠ）、TGF-β1含量；Western blot检测肾组织中IL-6、IL-1β、CollagenⅠ、α-SMA、TGF-β1蛋白表达。结果：miR-203在DN大鼠肾组织及肾小管上皮细胞中表达降低（P＜0.05）,PEG3/NF-κB在DN大鼠肾组织及肾小管上皮细胞中表达升高（P＜0.05）。miR-203与PEG3之间有靶向结合位点。上调miR-203表达，可抑制DN大鼠及细胞模型PEG3/NF-κB激活，降低炎症-纤维化相关因子表达，缓解大鼠肾组织结构损伤、肾功能下降等DN病理症状（P＜0.05）。pcDNA-PEG3可部分逆转miR-203的上述作用（P＜0.05）。结论：miR-203可靶向负调控PEG3/NF-κB通路，上调miR-203表达，可靶向抑制PEG3/NF-κB通路活化，发挥抗DN肾脏炎症-纤维化病变。