兔脑死亡状态对肝脏蛋白质表达谱的影响

摘要

目的分析兔脑死亡状态下肝脏存在的差异蛋白质,为揭示脑死亡状态下肝脏损伤的影响因素提供实验依据。方法采用缓慢颅内加压法建立兔脑死亡模型。提取脑死亡后6 h标本蛋白质进行双向凝胶电泳。利用PDQuest凝胶图像分析软件对图像进行分析。将两组间差异在2倍以上的蛋白质点行基质辅助激光解析离子化飞行时间质谱鉴定。在NCBI数据库中检索,鉴定出相应的蛋白质,并用蛋白印迹法进行验证。结果双向凝胶电泳显示,假手术组可检测到大约（973±34）个蛋白质点,脑死亡组可检测到大约（987±38）个蛋白质点。经成组比较共计有52个明显差异表达的蛋白质点,与假手术组相比,上调29个,下调23个。10个差异蛋白点分别为线粒体醛脱氢酶、过氧化物酶6、3磷酸肌醇依赖性蛋白激酶1、3-巯基丙酮酸硫基转移酶、乙醇脱氢酶、二氢嘧啶酶相关蛋白4、Runt相关转录因子1、无机焦磷酸酶、谷氨酸-半胱氨酸连接酶的调节亚基、微粒细胞色素B5。其中,RUNX1是我们比较关注的一个蛋白。通过蛋白印迹法对RUNX1在各组织中的表达情况进行验证发现,随着脑死亡时间的延长,RUNX1在肝脏中的表达逐渐减少。结论双向凝胶电泳结合质谱鉴定是差异蛋白质组学研究的可靠平台和有力工具,鉴定出的蛋白质RUNX1可能与脑死亡后肝脏损伤的发生、发展有关,有助于对脑死亡后肝脏损伤机制的了解。