紫花苜蓿尖孢镰刀菌ATMT遗传转化体系的建立

摘要

为研究紫花苜蓿尖孢镰刀菌致病的分子机理,将带有潮霉素抗性标记和绿色荧光蛋白报告基因的双元载体,采用根癌农杆菌转化法(ATMT法)转入紫花苜蓿尖孢镰刀菌Ms210分生孢子中,共获得137株阳性转化子。随机挑选15株阳性转化子研究其菌落形态、菌丝生长速率、产孢量、粗毒素分泌量和致病力,结果表明15株转化子中有3株的生长速率比对照显著降低(P<0.05),其中转化子Ms210-04生长速率降低最显著,仅为11.08 mm/d,其余转化子与野生型菌株Ms210差异不显著;15株转化子中有3株的产孢量显著低于菌株Ms210,其中转化子Ms210-14产孢量最低,为7.05×10^(6)个/mL,其余转化子与野生型菌株Ms210差异不显著;15株转化子中仅有2株的粗毒素分泌量与菌株Ms210无显著差异,有1株(1.41 mg/mL)显著升高,其余均较菌株Ms210显著降低,转化子Ms210-01粗毒素分泌量最低,仅为0.81 mg/mL;15株转化子中只有4株转化子的致病力较菌株Ms210显著降低,其余均与菌株Ms210无显著差异;说明转化子的生长速率、产孢量、粗毒素分泌量和致病力会因外源基因的随机插入而产生变化。同时,获得1株在上述各方面同菌株Ms210无显著差异的转化子Ms210-03。