miR-103a-3p靶向CEMIP基因调控肺癌细胞增殖与凋亡的分子机制

摘要

目的 探究微小RNA-103a-3p(miR-103a-3p)对肺癌细胞增殖、凋亡的影响及其与CEMIP基因的靶向调控关系.方法 体外培养人正常肺上皮细胞BEAS-2B与肺癌H1299、A549、SPC-A-1细胞,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)与Western印迹检测细胞中miR-103a-3p与CEMIP的表达.将肺癌A549细胞分为miR-con组、miR-103a-3p组、si-con组、si-CEMIP组、miR-103a-3p+pcDNA组、miR-103a-3p+pcDNA-CEMIP组.四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测各组细胞增殖情况;流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况.双荧光素酶报告实验检测miR-103a-3p与CEMIP的靶向调控关系.Western印迹检测细胞中免抗鼠细胞周期蛋白(Cyclin)依赖性激酶(CDK)4、CyclinD1、B细胞淋巴瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关x蛋白(Bax)蛋白表达情况.结果 在H1299、A549、SPC-A-1细胞中,与BEAS-2B细胞相比,miR-103a-3p的表达显著降低(P<0.05),而CEMIP的表达显著升高(P<0.05),二者在A549细胞中的表达变化最为显著,因此选取A549细胞进行后续实验;上调miR-103a-3p表达或沉默CEMIP表达后肺癌A549细胞增殖活性显著降低(P<0.05),细胞凋亡率显著增加(P<0.05),显著促进Bax表达(P<0.05),而显著抑制CDK4、Cyclin D1、Bcl-2表达(P<0.05);miR-103a-3p可负性调控靶基因CEMIP表达(P<0.05);显著上调miR-103a-3p表达联合CEMIP过表达可显著增强肺癌A549细胞增殖活性(P<0.05),显著抑制细胞凋亡,促进CDK4、CyclinD1、Bcl-2表达(P<0.05),而显著抑制Bax表达(P<0.05).结论 miR-103a-3p过表达可通过靶向调控CEMIP表达而抑制肺癌细胞增殖并诱导细胞凋亡.