shRNA沉默SGK3基因抑制MB-474细胞凋亡、侵袭和转移潜能

摘要

目的观察血清/糖皮质激素调节激酶(SGK)3基因沉默对MB-474乳腺癌细胞凋亡、侵袭、迁移潜能的影响。方法将SGK3-shRNA重组慢病毒表达载体转染至乳腺癌MB-474细胞,将细胞分为亲本细胞MB-474组、空载体474-LV3-NC组、PGC-LV3-SGK3-1、PGC-LV3-SGK3-2、PGC-LV3-SGK3-3组,通过荧光显微镜和免疫印迹方法观察转染效率和内源性SGK3基因沉默的效果;流式细胞术检测细胞凋亡比例;细胞黏附实验观察细胞在基质胶中的黏附性;细胞伤口愈合实验和Tanswell迁移实验观察细胞运动迁移能力的变化。结果荧光显微镜下各组转染细胞均可见绿色荧光且荧光信号较强;免疫印迹结果显示,MB-474细胞转染重组慢病毒PGC-LV3-SGK3-1后,其SGK3的蛋白表达明显减少,基因沉默效果显著;SGK3基因沉默后,MB-474细胞凋亡比例较亲本细胞和对照组细胞明显上升,而细胞在基质胶中的黏附性却明显下降(P<0.05);SGK3基因沉默后MB-474细胞运动迁移能力低于亲本细胞和对照组细胞,差异显著(P<0.05)。结论SGK3基因沉默可促进乳腺癌细胞MB-474凋亡、抑制细胞黏附和迁移等生物学行为,蛋白激酶SGK3有望成为乳腺癌生物治疗的新靶点。