MicroRNA-133b对烟草提取物诱导的人小气道上皮细胞间充质转化的影响

摘要

目的探讨微小RNA（miR）-133b对烟草提取物（CSE）诱导的人小气道上皮细胞间充质转化的影响及其调控机制。方法基因表达数据库（GEO数据库）中搜索慢性阻塞性肺疾病患者气道上皮细胞miR的表达谱芯片, 寻找差异表达的miR并用实时荧光定量聚合酶链反应法（qRT-PCR）验证;小气道上皮细胞（HSAEpiC）根据干预方式不同分为对照组、CSE组、CSE+miR-133b抑制剂转染组（抑制剂组）, CSE+miR-133b抑制剂对照转染组（抑制剂对照组）。观察各组细胞形态变化, qRT-PCR法检测各组miR-133b、转化生长因子（TGF）-β1 mRNA、Smad2 mRNA、钙黏附蛋白E（E-cadherin）mRNA与波形蛋白（Vimentin）mRNA, 酶联免疫吸附法（ELISA）及免疫印迹法（Western blot）检测细胞上清液及细胞E-cadherin与Vimentin蛋白水平。结果在GSE53519发现9个差异表达的miR, 验证后发现miR-133b在HSAEpiC细胞模型中表达差异最为显著。CSE诱导HSAEpiC细胞形态改变, miR-133b抑制剂能部分逆转细胞形态变化。CSE诱导HSAEpiC细胞上皮表型标志物E-cadherin mRNA及蛋白表达减少、间质表型标志物Vimentin mRNA及蛋白表达增多（F=9.09、12.35、7.57、101.87, P=0.015、0.007、0.023、0.000）;miR-133b抑制剂能部分逆转E-cadherin Vimentin mRNA及蛋白表达（F=40.59、27.74、15.87、20.42, P=0.000、0.001、0.004、0.002）。CSE诱导HSAEpiC细胞TGF-β1 mRNA、Smad mRNA表达增多, miR-133b抑制剂部分逆转TGF-β、mRNA、Smad mRNA的改变（F=17.25、64.15, P=0.003、0.000）。结论 miR-133b可能通过TGF-β/Smad通路调控CSE诱导的HSAEpiC细胞上皮间充质转化。