氯化锂通过上调焦磷酸水平抑制血管平滑肌细胞钙化

摘要

目的探讨氯化锂对血管平滑肌细胞钙化的影响及其可能的作用机制。方法体外培养人主动脉血管平滑肌细胞, 用钙化培养基（无机磷浓度为3 mmol/L）建立平滑肌细胞钙化模型。药物处理组用氯化锂（10 mmol/L）预处理细胞4 h后加入3 mmol/L的无机磷, 继续培养细胞数天后用茜素红染色检测细胞钙盐沉积水平, 同时应用焦磷酸偶联酶反应底物烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）消耗法, 酶标仪（OD340）检测细胞外焦磷酸的分泌;实时荧光定量聚合酶链式反应（real-time PCR）和免疫印迹法（Western blot）检测细胞中ankh基因的表达;采用慢病毒感染人主动脉平滑肌细胞的方法, 建立对照细胞组和ankh敲低的实验细胞组, 并观察其对细胞钙化的影响。结果高磷细胞组钙化检测值为（65.00±2.11）ng/g, 较对照细胞组（12.39±0.38）ng/g钙化水平明显升高（P＆0.01）。氯化锂预处理细胞的钙化检测值为（24.92±1.87）ng/g, 与高磷对照组（60.94±4.51）ng/g比较能显著抑制高磷诱导的血管平滑肌细胞钙化（P＆0.01）;氯化锂预处理明显上调细胞外液中焦磷酸的含量, 基础条件下预处理组为（51.70±7.26）×10-3 mmol/g, 对照组为（28.71±2.55）×10-3mmol/g（P＆0.01）;高磷刺激下预处理组为（34.35±4.27）×10-3mmol/g, 对照组为（20.89±4.93）×10-3mmol/g（P＆0.05）, 同时氯化锂预处理显著升高细胞ankh表达水平（P＆0.01）;而敲低ankh使无机磷诱导的血管平滑肌细胞钙化程度显著加重, 敲低ankh细胞钙化检测值为（71.73±2.45）ng/g, 对照组为（56.19±3.59）ng/g（P＆0.01）。结论氯化锂通过上调平滑肌ANKH的表达, 升高细胞外液中的焦磷酸水平, 抑制高磷诱导下血管平滑肌细胞的钙化。