同位素标记相对和绝对定量技术的糖尿病小鼠视网膜细胞凋亡蛋白研究

摘要

目的应用同位素标记相对和绝对定量（iTRAQ）技术对糖尿病小鼠视网膜蛋白组学进行研究并对细胞凋亡相关蛋白进行初步分析。方法 8只雄性糖尿病小鼠为糖尿病组（DM组）,8只同龄正常小鼠为对照组。饲以标准颗粒饲料并分笼喂养,自由饮食,观察10周。实验结束时,禁食12 h处死,迅速分离视网膜,苏木精-伊红（HE）染色制作光镜组织切片观察病理结构改变。应用iTRAQ技术筛选鉴定差异表达蛋白,对细胞凋亡相关蛋白进行初步分析。结果光镜下对照组小鼠视网膜各层排列整齐,结构清晰,糖尿病组小鼠视网膜各层结构疏松,组织水肿和毛细血管扩张现象明显。蛋白质组学筛选鉴定差异蛋白共348个,其中细胞凋亡相关的差异蛋白共16个,包括N-myc下游调节基因1蛋白、黏蛋白4、水通道蛋白1、信号转导和转录激活因子5B等。其中在糖尿病组小鼠视网膜表达上调者8个,下调者8个。Ingenuity Pathway Analysis（IPA）软件显示部分蛋白间交互作用网络。结论细胞凋亡参与了糖尿病视网膜病变的发生发展,筛选鉴定该过程相关差异蛋白可为进一步的研究奠定基础。