利用CRISPR/Cas9技术建立基因外显子敲除小鼠模型

摘要

目的利用CRISPR/Cas9系统建立钙结合蛋白S100a9基因外显子定向敲除小鼠。方法在S100a9基因第1个外显子5′端及第2个外显子3′端设计gRNA靶点,体外转录获得gRNA,利用Cas9蛋白体外检测gRNA切割效率。选取效率高的gRNA和(as9 mRNA注射C57BL/6小鼠受精卵,进行胚胎移植,利用PCR和测序方法检测F0代小鼠S100a9基因外显子敲除情况。结果 F0代出生9只小鼠,PCR鉴定其中4只具有长片段删除,效率为44.4%;测序鉴定3只小鼠完全敲除了第1和第2外显子,1只敲除了第2外显子。结论成功建立利用CRISPR/Cas9系统定向敲除基因外显子的方法,获得了S100a9基因第1和第2外显子敲除的小鼠。