黄芪甲苷对肿瘤坏死因子-α诱导的大鼠血管平滑肌细胞基质金属蛋白酶表达的影响

摘要

目的观察黄芪甲苷（AS-Ⅳ）在肿瘤坏死因子（TNF-α）的诱导下,对离体大鼠血管平滑肌细胞（VSMCs）基质金属蛋白酶（MMPs）表达的影响。方法（1）采用组织贴块法培养大鼠血管平滑肌细胞,倒置相差显微镜和平滑肌肌动蛋白（α-SM-actin）进行细胞形态学和免疫组织化学鉴定;（2）以重组大鼠TNF-α（100/μg/L）作为刺激因素,建立体外平滑肌细胞增殖模型,并分组如下:①对照组;②TNF-α组;③TNF-α+AS-Ⅳ0.5 mg/L;④TNF-α+AS-Ⅳ5 mg/L;⑤TNF-α+AS-Ⅳ25 mg/L;⑥TNF-α+AS-Ⅳ50 mg/L;（3）应用CCK-8法检测AS-Ⅳ对TNF-α诱导的VSMCs增殖能力影响;（4）应用实时PCR和Western-blot实验分别检测AS-Ⅳ对VSMCs分泌的MMP-2及其抑制因子（TIMP-2）mRNA和蛋白表达水平的影响。结果（1）在TNF-α刺激下,VSMCs增殖活性、迁移距离、侵袭能力与对照组相比均明显提高（P＜0.01）,提示TNF-α可促进VSMCs的增殖、迁移,成功建立了体外细胞实验模型。（2）CCK-8实验结果显示,细胞经TNF-α孵育至预定时间后,细胞增殖明显,吸光度（A）值上升（P＜0.01）。经药物预处理后,各浓度组细胞增殖均受到抑制,与同期TNF-α组相比A值降低（P＜0.05）,且随着药物浓度和作用时间的增加,细胞生长抑制更加明显,提示AS-Ⅳ以时间和浓度依赖方式抑制了TNF-α诱导的VSMCs增殖。（3）实时荧光定量PCR和Western-blot结果显示,TNF-α能够通过诱导act MMP-2的合成,对proMMP-2及TIMP-2的表达无明显影响来改变MMPs与TIMPs的比例,进而促进ECM的降解。经药物干预后,AS-Ⅳ以浓度依赖方式通过下调TNF-α诱导的MMP-2过表达,上调TIMP-2的mRNA及蛋白表达,恢复MMPs与TIMPs的比例,使ECM降解减少,从而实现对VSMCs增殖、迁移的抑制作用。结论黄芪甲苷能够以时间和浓度依赖方式抑制TNF-α诱导的VSMCs增殖、迁移;黄芪甲苷通过下调TNF-α诱导的MMP-2过表达,上调TIMP-2的表达,恢复MMPs与TIMPs的比例,使ECM降解减少,限制了VSMCs的迁移、增殖,从而实现对经皮冠状脉介入治疗术术后再狭窄的防治作用。