乙型肝炎病毒HBeAg上调S100钙结合蛋白A11基因启动子表达活性的研究

摘要

目的探讨乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)对S100钙结合蛋白A11(calgizzarin S100A11)启动子转录的激活作用.方法以我室构建的HBeAg反式调节基因的cDNA文库抑制性消减杂交(SSH)筛选结果为基础,利用生物信息学技术确定S100A11的启动子区域(S1OOA11-p),聚合酶链反应(PCR)扩增S100A11-p,克隆至真核报告载体PCAT3中,构建pCAT3-S100-p报告载体,以该质粒转染肝癌细胞系HepG2细胞系,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测氯霉素乙酰转移酶(CAT)的表达活性,并与pcDNA3.1(-)-HBeAg共转染HepG2细胞系,用ELISA法检测CAT的表达活性.结果pCAT3-S100-p在HepG2细胞中能够指导CAT的表达;共转染实验中pCAT3-S100-P-pcDNA3.1(-)-HBeAg组CAT的表达活性是pCAT3-S100-p组的6.1倍.结论我室克隆的S100A11启动子有顺式激活下游基因的活性,HBeAg具有对S100A11的反式激活作用.本实验进一步验证了我室利用SSH技术研究HBeAg反式激活作用的结果.