长非编码RNA TUSC7对结直肠癌细胞奥沙利铂耐药性的影响及其机制

摘要

目的探讨长非编码RNA TUSC7（TUSC7）对调控结直肠癌多药耐药细胞株LOVO/奥沙利铂（L-OHP）细胞的影响及分子机制。方法采用实时定量聚合酶链反应（Real-time PCR）检测TUSC7、miR-10a在结直肠癌多药耐药细胞株LOVO/L-OHP、亲本细胞株LOVO中的表达。利用脂质体Lipofectamine? 2000将pcDNA-TUSC7质粒和（或）miR-10a mimic转染LOVO/L-OHP细胞,构建过表达TUSC7和（或）miR-10a细胞。Real-time PCR检测转染后LOVO细胞中TUSC7、miR-10a表达量。Real-time PCR、蛋白质印迹法（Western blot）、噻唑蓝（MTT）、Transwell小室实验、细胞划痕实验检测过表达TUSC7对LOVO/L-OHP细胞miR-10a及其下游靶基因第10号染色体上缺失与张力蛋白同源的磷酸酯酶基因（PTEN）、EphA8蛋白表达、增殖能力、侵袭能力、迁移能力及化疗敏感性的影响。应用SPSS 13.0软件对结果进行统计分析。结果 LOVO/L-OHP细胞中TUSC7表达水平（0.238±0.048）显著低于LOVO细胞（0.628±0.041,t=10.103,P＆0.01）,miR-10a表达水平（4.758±0.275）显著高于LOVO细胞（2.258±0.327,t=-34.179,P＆0.01）。转染后TUSC7组TUSC7及PTEN、EphA8蛋白表达水平（9.358±1.348、4.252±0.213、5.002±0.313）显著高于对照组（0.206±0.037、0.588±0.101、0.728±0.114,t=-11.755、-26.921、-22.223,P＆0.01）,miR-10a表达水平（2.114±0.218）明显低于对照组（4.914±0.412,t=10.405,P＆0.01）;TUSC7组细胞活性、穿膜细胞数、伤口愈合率、半数抑制浓度（IC50）值（1.642±0.120、103.000±23.763、32.014±3.479、3.316±0.579）均显著低于对照组（2.760±0.173、538.250±38.922、63.816±4.650、9.842±2.141,t=13.007、19.089、10.103、6.579,P＆0.01）。TUSC7+mimic组miR-10a表达水平（3.648±0.288）明显高于TUSC7组（2.114±0.218,t=-7.356,P＆0.01）,PTEN、EphA8蛋白表达水平（2.888±0.315、3.544±0.351）显著低于TUSC7组（4.252±0.213、5.002±0.313,t=6.213、5.370,P＆0.01）;细胞活性、穿膜细胞数、伤口愈合率、IC50值（2.166±0.140、283.750±28.802、44.148±5.517、5.624±0.668）显著高于TUSC7组（1.642±0.120、103.000±23.763、32.014±3.479、3.316±0.579,t=-6.961、-9.681、12.245、5.838,P＆0.01）。结论过表达TUSC7通过靶向调控miR-10a的表达降低LOVO/L-OHP细胞的增殖和侵袭转移能力,从而提高LOVO/L-OHP细胞对L-OHP的敏感性。