过表达线粒体融合蛋白2对阿霉素诱导下血管内皮祖细胞衰老及凋亡的影响

摘要

目的探讨过表达线粒体融合蛋白2（Mfn2）对阿霉素（Dox）诱导下血管内皮祖细胞（EPCs）衰老及凋亡的影响。方法抽取SD雄性大鼠外周动脉血,分离培养EPCs,进一步分为,正常EPCs组、空载体组、Mfn2过表达组,经0.2 μmol/L和2.0 μmol/L Dox诱导,通过激光共聚焦显微镜观察线粒体分裂情况;通过β-半乳糖苷酶活性检测、原位末端标记法（TUNEL）染色,检测细胞衰老和凋亡情况;蛋白印迹法检测细胞衰老标志蛋白多肿瘤抑制基因1（p16INK4A）的表达;实时荧光定量聚合酶链反应检测内皮型一氧化氮合酶（eNOS）及血管性血友病因子（vWF）的表达。多组间均数比较采用单因素方差分析。结果在0.2 μmol/L和2.0 μmol/L Dox处理下,Mfn2过表达组[（5.83±1.71）%、（6.72±0.57）%]线粒体分裂的细胞比例低于正常EPCs组[（19.16±0.82）%、（68.56±5.31）%]和空载体组[（17.53±2.86）%、（66.54±2.86）%,F=40.403、302.725,P＆0.05],差异均有统计学意义;在0.2 μmol/L Dox处理下,Mfn2过表达组[（15.0±0.33）%]β-半乳糖苷酶活性升高的细胞比例低于正常EPCs组[（35.0±0.61）%]和空载体组[（36.0±1.23）%,F=637.291,P＆0.05],差异均有统计学意义;在2 μmol/L Dox处理下,Mfn2过表达组[（11.90±0.50）%]TUNEL+细胞的比例低于正常EPCs组[（34.50±0.80）%]和空载体组[（35.20±1.60）%,F=458.327,P＆0.05],差异均有统计学意义;在0.2 μmol/L Dox处理条件下,Mfn2过表达组eNOS mRNA（0.65±0.02）和vWF mRNA（0.65±0.01）的相对表达高于正常EPCs组（0.43±0.03、0.50±0.02）以及空载体组（0.34±0.02、0.48±0.02,F=134.643、71.646,P＆0.05）,差异均有统计学意义;在2.0 μmol/L Dox处理条件下,Mfn2过表达组eNOS mRNA（0.71±0.02）和vWF mRNA（0.66±0.03）的表达高于正常EPCs组（0.33±0.02、0.28±0.02）以及空载体组（0.38±0.03、0.35±0.01,F=225.712、262.934,P＆0.05）,差异均有统计学意义。结论过表达Mfn2可以抑制线粒体分裂,拮抗Dox诱导下EPCs的衰老及凋亡,恢复EPCs的功能。