小干扰RNA对胃癌细胞葡萄糖调节蛋白94表达的抑制作用

摘要

目的构建Grp94靶向RNA干扰质粒载体,观察其对人类胃癌细胞株SGC-7901 Grp94基因表达的抑制作用。方法从GenBank中选取人类Grp94基因序列,采用siRNA Target Designer-Version 1.51设计软件设计1对Grp94基因发卡寡核苷酸,序列符合siRNA表达载体siS- TRIKETMU6的要求并与psiSTRIKETM质粒载体连接,构建受控于人RNA聚合酶Ⅲ启动子U6的真核表达载体。采用LipofectamneTM2000转染试剂进行转染,将重组质粒导入人类胃癌细胞株SGC- 7901内,分别在转染前、转染后24、48和72h通过逆转录.聚合酶链反应（RT-PCR）、Western blot及免疫荧光技术检测Grp94 mRNA及蛋白水平的表达情况。结果成功构建RNA干扰质粒载体,靶向Grp94干扰质粒载体命名为psiSTRIKETM/Grp94,将上述质粒转染到人类胃癌细胞株后,观察到psiSTRIKETM/Grp94能够明显下调Grp94 mRNA及蛋白水平的表达,并随着时间推移稳定存在。结论构建的RNA干扰真核表达载体psiSTRIKETM/Grp94能明显抑制Grp94 mRNA及蛋白的表达,提示通过降低胃癌细胞中Grp94的表达,可能抑制或辅助抑制胃癌细胞的生长的作用。