特异性抑制人骨肉瘤细胞中EAG1基因表达的短发卡RNA筛选和鉴定

摘要

目的筛选出能高效抑制骨肉瘤细胞株MG63中人EAG1（hEAG1）基因表达的短发卡RNA（shRNA）。方法根据人EAG1信使RNA（mRNA）的序列,设计合成4对不同的且能干扰hEAG1基因表达的shRNA。利用同源重组技术构建pGeneSil-hEAG1干扰载体,经酶切及测序鉴定后体外转染MG63细胞。采用半定量逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和蛋白印迹法（Western blot）分别检测hEAG1 mRNA和蛋白的表达。结果成功合成4对shRNA。细胞转染结果显示48 h后实验组和对照组均有强荧光表达,转染率为70%。pGeneSil-hEAG1-2组的干扰效果最为明显,hEAG1 mRNA和蛋白表达较对照组明显下调,与其他组之间差异有统计学意义（P＜0.05）。结论成功筛选出的shRNA可高效阻断hEAG1的表达,可能成为骨肉瘤靶向性治疗的新策略。