人乳腺癌多西他赛耐药细胞株BT549/Docetaxel干细胞分选及三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2基因表达水平

摘要

目的分选人乳腺癌多西他赛（Docetaxel）耐药细胞株BT549/Docetaxel干细胞,探讨其生物学特征。方法采用悬浮培养联合多西他赛法分选耐药细胞株BT549/Docetaxel干细胞,采用悬浮培养法富集BT549、BT549/Docetaxel干细胞,进行CD44、CD24细胞标记和流式细胞仪检测,反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法检测BT549、BT549/Docetaxel干细胞中三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2（ABCG2）基因表达。结果 BT549/Docetaxel与BT549干细胞的群体倍增时间分别为（39.22±0.65）、（29.20±0.50）h,差异有统计学意义（P＜0.05）。流式分析显示,BT549微球体细胞的CD44+/CD24-/low比例为（13.8±0.5）%,高于单层培养BT549细胞的比例（2.8±0.6）%（P＜0.01）。BT549/Docetaxel微球体细胞的CD44+/CD24-/low比例为（19.1±0.3）%,高于单层培养BT549/Docetaxel细胞的比例（5.0±0.4）%（P＜0.01）。BT549/Docetaxel微球体细胞的CD44+/CD24-/low比例高于BT549微球体细胞的CD44+/CD24-/low比例,差异有统计学意义（P＜0.05）。BT549干细胞内药物的含量为（46.9±0.5）ng/10~6个细胞,BT549/Docetaxel干细胞内药物的含量为（7.1±0.3）ng/10~6个细胞,两者比较差异有统计学意义（P＜0.01）。正常培养基培养4 h后,BT549细胞内药物的含量为（28.3±0.6）ng/10~6个细胞,BT549/Docetaxel细胞内药物的含量（3.5±0.1）ng/10~6个细胞,两者比较差异有统计学意义（P＜0.01）。ABCG2的mRNA在BT549/Docetaxel干细胞内表达量明显高于在BT549干细胞内中的表达,两者差异有统计学意义（P＜0.01）。结论成功筛选人乳腺癌多西他赛耐药细胞株BT549/Docetaxel干细胞,生长及耐药性稳定。ABCG2基因在BT549/Docetaxel干细胞内表达量明显增高。