天冬氨酸β羟化酶对细胞自噬的调节作用

摘要

目的观察天冬氨酸β羟化酶（ASPH）在调节细胞自噬中的作用。方法向OUMS-29、HEK-293T细胞转染ASPH质粒,Western blot检测转染后细胞p62、微管相关蛋白1轻链3（LC3）-Ⅱ的表达;向OUMS-29细胞共转染ASPH、pEGFP-LC3质粒,荧光显微镜下计算绿色荧光蛋白（GFP）-LC3-Ⅱ点状聚集阳性细胞数占GFP阳性细胞数的比率。沉默HuCCT1、SSP25细胞ASPH基因,Western blot检测细胞p62、LC3-Ⅱ的表达,并用噻唑蓝（MTT）法检测细胞自噬诱导剂雷帕霉素（Rapa）或二甲双胍（Met）对细胞生长速率的影响。结果过表达ASPH使OUMS-29、HEK-293T细胞内LC3-Ⅱ表达下降44%（P=0.002,P=0.008）,但不改变p62表达量（P=0.060,P=0.798）;过表达ASPH使OUMS-29细胞GFP-LC3-Ⅱ点状聚集阳性细胞数占GFP阳性细胞数比率由50.84%降至28.31%（P=0.002）;ASPH基因沉默使HuCCT1、SSP25细胞内LC3-Ⅱ表达分别上调87%、133%（P=0.001,P=0.000）,但不影响p62表达（P=0.677,P=0.168）;细胞自噬诱导剂雷帕霉素或二甲双胍掩盖ASPH沉默对HuCCT1、SSP25细胞生长速率的影响。结论 ASPH通过抑制LC3-Ⅱ生成抑制细胞自噬;ASPH对细胞自噬的调节可能是其参与细胞生长调控的机制之一。