siRNA-YAP1对TGF-β_(2)诱导的人晶状体上皮细胞上皮-间质转化的抑制作用

摘要

目的探讨小干扰RNA-Yes相关蛋白1(siRNA-YAP1)对转化生长因子β^(2)(TGF-β^(2))诱导的人晶状体上皮细胞(LECs)发生上皮-间质转化(EMT)的抑制作用。方法将人LECs株HLEB-3细胞分为对照组和TGF-β^(2)诱导组,正常对照组采用无血清低糖培养基处理细胞,TGF-β^(2)诱导组采用10 ng/ml TGF-β^(2)处理细胞,分别培养24 h。另将HLEB-3细胞分为siRNA空载体组、siRNA-YAP1转染组、siRNA空载体+TGF-β^(2)组和siRNA-YAP1+TGF-β^(2)组,分别采用含有siRNA空载体和siRNA-YAP1序列的质粒转染细胞。采用实时荧光定量PCR、细胞免疫荧光染色和Western blot法检测各组细胞中转录共激活因子Yes相关蛋白1(YAP1)mRNA及其蛋白的相对表达量;采用细胞免疫荧光、Western blot法检测各组中LECs EMT相关标志物E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)在细胞中的表达变化。结果 TGF-β^(2)诱导组中E-cadherin蛋白相对表达量为0.830±0.104,低于正常对照组的1.180±0.118,TGF-β^(2)诱导组中Vimentin蛋白相对表达量为1.240±0.110,高于正常对照组的0.797±0.110,差异均有统计学意义(t=3.857,P=0.018;t=-4.933,P=0.008);TGF-β^(2)诱导组YAP1 mRNA和蛋白的相对表达量分别为2.200±0.193和1.203±0.121,显著高于正常对照组的1.136±0.123和0.967±0.025,差异均有统计学意义(t=-9.288,P<0.01;t=-3.329,P=0.029)。与siRNA空载体组比较,siRNA-YAP1转染组细胞中YAP1 mRNA及蛋白相对表达量明显下降,差异均有统计学意义(均P<0.01)。与siRNA空载体+TGF-β^(2)组比较,siRNA-YAP1+TGF-β^(2)组细胞中E-cadherin蛋白相对表达量明显升高,Vimentin蛋白相对表达量明显下降,差异均有统计学意义(均P<0.01)。结论 YAP1参与TGF-β^(2)诱导的HLEB-3细胞EMT过程,siRNA-YAP1抑制TGF-β^(2)诱导的人LECs EMT过程。