乙酰肝素酶抑制剂对人脐静脉内皮细胞增生和乙酰肝素酶表达的影响

摘要

背景已有动物研究表明，乙酰肝素酶（HPA）在脉络膜新生血管（CNV）中呈高表达，提示其与新生血管的形成密切相关。确定HPA抑制剂是否可影响血管的生成和发展对研究CNV的治疗有重要意义。目的探讨HPA抑制剂硫代磷酸甘露醇戊糖（PI-88）对HPA的表达及体外培养的人脐静脉内皮细胞（UVEC）增生的作用。方法人UVEC原代细胞株采用内皮细胞培养基（ECM）进行培养和传代，第3—5代细胞用于实验。用ECM配制PI-88溶液，使其终质量浓度为400．00、200．00、100．00、50．00、25．00、12．50、6．25mg／L，分别加入内皮细胞培养基培养24、48、72h后，用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法检测细胞的吸光度（A570）值；并采用免疫组织化学法观察不同质量浓度PI-88作用48h后细胞中HPA的表达。结果正常培养的第3代人UVEC呈梭形或多角形。相同质量浓度PI-88作用不同时间培养的人UVECA。值差异有统计学意义（F=9．656，P=0．002），不同质量浓度PI-88作用相同时间培养的人UVECA。值差异无统计学意义（F=2．721，P=0．053）。PI_88作用24h，各质量浓度PI-88组与0mg／LPI-88组UVECA。值的差异均无统计学意义（P〉0．05），当PI-88的质量浓度〉50．00mg／L时，培养72h的人UVECA。值均明显低于0mg／LPI-88组，差异均有统计学意义（P〈0．05）。PI-88作用延长至48h和72h时，在〈50．00mg／LPI-88组人UVECA。值均明显高于作用24h时，差异均有统计学意义（P〈0．05）；但各时间点≥100．00mg／LPI-88组人UVECA。值差异均无统计学意义（P〉0．05）。HPA在生长旺盛的UVEC细胞质内呈强阳性表达，少数细胞核也有表达；不同质量浓度PI-88溶液干预48h，25．00mg／LPI-88组人UVEC中HPA在细胞质内表达明显减弱。结论PI-88能够抑制人UVEC的增生，尤其是当PI-88的质量浓度〉100．00mg／L，其对人UVEC增生的抑制作用呈剂量和时间依赖性．其作用机制主要是下调HPA在人UVEC中的表达。