HAD患者来源的HIV-1 Nef蛋白对U87细胞分泌TNF-α和IL-1β细胞因子的影响

摘要

目的 探讨HIV-1负调控因子(Nef)在HIV-1神经致病性中的作用.方法 从HIV-1相关痴呆(HIV-associated dementia,HAD)患者的中枢神经系统(central nervous system,CNS)和外周5个部位(基底结、额叶皮质、脑膜、颞叶皮质和脾)中获得5株不同的HIV-1 nef基因,与载体pcDNA3.1连接构建重组的pcDNA3.1-nef真核表达载体,转染人神经胶质瘤细胞U87.转染后22 h、27 h、32 h、37 h和42h经免疫组化法和Western blot检测Nef蛋白表达情况,采用JEDA801D和JD-801软件对结果进行半定量分析.转染后27 h～62 h,每间隔5h收集U87细胞的培养上清,ELISA测定上清中两种细胞因子TNF-α和IL-1β的含量,分析两种细胞因子的动态表达情况.结果 成功构建5株来自一例HAD患者不同部位组织的nef基因的重组的pcDNA3.1-nef真核表达载体,转染U87细胞.免疫组化实验的结果显示,Nef蛋白在转染后42 h开始表达,Western blot进一步证实了这一结果.ELISA结果显示,转染后22 h、27 h、32 h、37 h,各组上清中细胞因子的含量随时间逐渐增多,但各组间的差异均无统计学意义(TNF-α:F=0.445,P=0.837;F=0.579,P=0.742;F=0.617,P=0.714;F=2.728,P=0.057.IL-1β:F=2.656,P=0.062;F=0.485,P=0.809;F=0.165,P=0.982;F=2.463,P=0.093);42 h后,各组细胞因子含量逐渐降低,57 h～62 h,TNF-α及IL-1β含量基本维持稳定;转染后42 h、47 h、52 h、57 h、62 h,实验组两种细胞因子的含量明显高于对照组,差异有统计学意义(TNF-α:F=241.310,P＜0.001;F=242.638,P＜0.001;F=250.114,P＜0.001;F=143.877,P＜0.001;F=146.172,P＜0.001.IL-1β:F=251.578,P＜0.001;F=188.816,P＜0.001;F=276.240,P＜0.001;F=238.136,P＜0.001;F=163.361,P＜0.001),各对照组间或实验组间的差异无统计学意义(P＞0.05).结论 HIV-1 Nef蛋白能诱导并增强U87细胞分泌TNF-α和IL-1β的能力,而HAD患者体内不同来源的HIV-1 Nef蛋白发生氨基酸变异对U87细胞分泌TNF-α和IL-1β无影响.