腺病毒伴随病毒表达载体表达人乳头瘤病毒18型E6E7基因构建及其转化作用的鉴定

摘要

目的探讨人乳头瘤病毒(HPV)的E6E7基因在细胞恶性转化中所起的作用.方法将人乳头瘤病毒(HPV)的E6E7基因克隆至腺病毒伴随病毒表达载体中,通过包装的重组病毒感染,将E6E7基因导入并整合到永生293细胞的基因组中.结果本研究成功地构建了HPV18 E6E7 AAV病毒并感染了永生293细胞,PCR/Southern杂交分析表明E6E7基因在转化细胞293TL中确有表达,转化细胞293TC和293TL具有明显的转化表型,和亲本293细胞相比,生长速度快,接触抑制消失,集落形成率提高20倍,且集落明显增大,形成时间短.结论成功地构建了HPV18 E6E7 AAV病毒,HPV18 E6E7基因可引起永生化人上皮细胞293的恶性转化.此病毒可用于感染正常上皮细胞,研究其致癌机制.