乙型肝炎病毒前C区和BCP区突变株复制质粒的构建

摘要

目的构建乙型肝炎病毒(HBV)前C区和基本核心启动子区(BCP)突变株的复制质粒. 方法以含1.2倍拷贝HBV DNA全基因的质粒(pHBV1.2)为工具,采用分子克隆、PCR定点诱变、限制性酶切长度多态性和序列分析等技术构建目的质粒.转染肝癌细胞株Huh7后,测定培养上清HBsAg、HBV DNA来了解病毒抗原的表达和病毒复制. 结果成功构建了10种HBV全基因前C区/BCP区突变的表达质粒,转染肝癌细胞株,获得病毒的表达和病毒颗粒的分泌.其中,pUC-HBV T1762、A1764双突变以及pUC-HBV T1753突变株复制效率较高,转染细胞培养上清的HBV DNA为3.16×105拷贝/ml.野生型复制子培养上清HBV DNA含量稍低于BCP突变复制子.结论获得10株含有不同前C区和BCP区突变的HBV全基因复制质粒,为体外进一步研究上述变异的生物学意义提供基本模型.