多重RT-PCR结合反向杂交技术检测多种流感病毒方法的研究

摘要

目的建立一种基于多重RT-PCR结合反向斑点杂交技术的多种流感病毒核酸快速检测方法。方法对5种亚型流感病毒的HA基因序列进行比对分析,选择合适的保守区域设计引物序列,并在扩增产物序列内部选择高变区设计探针序列。首先,使用生物素标记的引物扩增出同样带标记的PCR产物;然后,产物与膜上的探针杂交,通过生物素-亲和素反应,最后以斑点显色的方式来检测和鉴别不同亚型的流感病毒。实验中还通过摸索不同的引物浓度和探针浓度来优化反应条件。结果成功建立了一种基于多重RT-PCR结合反向斑点杂交技术的检测方法,该方法能够成功检测和鉴别5种不同亚型的流感病毒,检测灵敏度比传统的RT-PCR方法高100～1000倍。结论成功建立了一种可高通量快速检测多种流感病毒的多重RT-PCR结合反向斑点杂交技术的检测方法。