人博卡病毒VP2蛋白的原核表达及血清学检测方法的建立

摘要

目的 获得高表达量的人博卡病毒（HBoV1、HBoV2）VP2蛋白,建立血清学检测方法。方法 按照大肠埃希菌密码子使用偏性,对HBoV1、HBoV2VP2衣壳蛋白基因编码区序列进行优化合成。将合成的目的基因克隆至表达载体pET30a,构建重组表达质粒pET30a-VP2,转化大肠埃希菌BL21（DE3）,使用IPTG诱导表达并摸索最佳表达条件;粗提取蛋白进行Ni亲和层析纯化后建立间接酶联免疫吸附试验（ELISA）,进行临床血清标本筛查,分析人群HBoV1、HBoV2感染情况。结果 优化合成的HBoV1、HBoV2VP2基因正确连接至pET30a载体,开放阅读框正确,用1mmol/LIPTG过夜诱导表达（25℃）得到高表达量的VP2蛋白,目的蛋白主要以包涵体的形式存在。粗提取蛋白经Ni-NTA亲和层析,在pH4.5时获得较理想的纯化蛋白,以其为抗原建立ELISA检查方法,筛查临床血清标本IgG抗体水平,结果显示健康儿童HBoV1阳性率为62.2%,HBoV2阳性率为55.5%,混合感染率为37%。结论 本研究成功将HBoV1、HBoV2VP2衣壳蛋白基因编码区序列进行优化,得到了较高的蛋白表达量,所建立的ELISA法可以应用于HBoV1、HBoV2人群血清流行病学调查。