尖锐湿疣组织中人乳头瘤病毒6和11型的感染率及其L1基因的表达

摘要

目的了解尖锐湿疣组织标本中人乳头瘤病毒6型（HPV-6）和11型（HPV-11）感染率的差异,构建HPV-6型主要衣壳蛋白L1基因原核表达系统,建立ELISA方法检测标本中L1基因表达情况。方法采用基于HPV-6型和HPV-11型L1基因的双重PCR,检测尖锐湿疣组织标本中HPV-6型和HPV-11型的感染率;采用PCR扩增HPV-6型全长L1基因,T-A克隆后测序,构建原核表达系统pET32a-L1-E.coliBL21（DE3）,采用SDS-PAGE检测目的重组蛋白rL1的表达。制备rL1兔抗血清,用免疫双扩散试验检测抗血清的效价;建立ELISA方法检测标本中L1基因的表达情况。结果116例患者尖锐湿疣组织标本中,92.2%（107/116）检出HPV-6型和/或HPV-11型。其中单一HPV-6型阳性者占70.1%（75/107）,单一HPV-11型阳性者占23.4%（25/107）,HPV-6型和HPV-11型混合感染者占6.5%（7/107）。与报道的相应序列比较,所克隆的HPV-6型L1基因核苷酸和氨基酸序列同源性分别为99.20%~99.93%和99.80%~100%。IPTG能诱导rL1表达,rL1兔抗血清免疫双扩散效价为1∶4。尖锐湿疣组织标本88.8%（103/116）检出L1蛋白。结论成功地构建了HPV-6型L1基因原核表达系统,并建立了HPV-6型和HPV-11型L1基因分型的双重PCR和L1蛋白ELISA检测方法。浙江省尖锐湿疣患者主要感染HPV-6型,病灶中HPV高频率表达病毒主要衣壳蛋白L1。