TRAIL联合喜树碱诱导胰腺癌细胞凋亡的研究

摘要

目的:探讨喜树碱(CPT)增强TRAIL诱导胰腺癌细胞PANC-1凋亡的机制.方法:通过MTT检测TRAIL组、喜树碱组、二者联合组对胰腺癌细胞PANC-1生长抑制的影响;利用Hoechst33258荧光染色检测各组细胞凋亡情况;应用Western-blot方法检测PANC-1在喜树碱应用前后凋亡信号传导蛋白分子DR4、DR5、Caspase-8、Caspase-3以及c-flip的表达情况.结果:PANC-1细胞经不同浓度TRAIL(10、30、100、300、1 000ng/mL)作用24h后,当浓度在100ng/mL及以上时与对照组相比有统计学差异(P＜0.01),虽然存在差异,但当TRAIL浓度为1 000ng/mL时,其细胞抑制率仅为(10.60±2.36)%,TRAIL与不同浓度的喜树碱(10、30、100、300、1 000ng/mL)联合作用后其细胞抑制率与单独应用喜树碱相比有显著性差异(P＜0.05);Hoechst33258荧光染色结果显示:联合组有大量细胞出现细胞核聚集、边缘化、核碎裂等典型细胞凋亡形态,而其余各组未见明显凋亡征象;Western-blot结果显示:单独TRAIL组及单独喜树碱组仅能看到Caspase-8和Caspase-3的前体,而二者联合后不仅看到了其前体,而且还看到其裂解带,并且发现经过喜树碱预处理后,PANC-1细胞中c-Flip蛋白的表达被明显下调了,CPT组及联合组与对照组及单独TRAIL相比均有显著性差异(P＜0.05),而喜树碱应用前后对DR4和DR5表达无显著效应.结论:TRAIL联合喜树碱对胰腺癌细胞PANC-1诱导的凋亡具有协同作用,其机制是喜树碱下调了c-Flip蛋白的表达,解除了其对Caspase-8的抑制,激活了死亡受体通路,与DR4和DR5无关.