高乌甲素对重度烧伤大鼠疼痛和炎症反应的作用及其机制

摘要

目的探讨高乌甲素（LA）对重度烧伤大鼠疼痛和炎症反应的作用及其机制。方法取40只SD大鼠按随机数字表法（下同）分为健康+生理盐水组、假伤+生理盐水组、单纯烧伤组、烧伤+LA组、健康+LA组,每组8只。单纯烧伤组、烧伤+LA组大鼠背部及右后肢造成约32%TBSA深Ⅱ度烫伤（以下称烧伤）,假伤+生理盐水组大鼠致假伤。烧伤+LA组大鼠于伤前2.0h及伤后即刻与伤后24.0、48.0、72.0 h分别腹腔注射1g/L LA溶液4mL/kg,健康+LA组大鼠于同前各时相点腹腔注射相同剂量的LA溶液,健康+生理盐水组、假伤+生理盐水组大鼠于同前各时相点腹腔注射生理盐水4mL/kg。于伤前1.5 h及伤后12.5、24.5、36.5、48.5、72.5 h,观察致伤大鼠疼痛行为并对大鼠行机械缩足反射阈值（PWMT）检测;未致伤2组大鼠于同前各时相点行相同观测。另取32只SD大鼠分为生理盐水组、三硝基苯基（TNP）-ATP组、米诺环素组、磷酸吡哆醛（PPADS）组,每组8只,均同前致烧伤。伤后48.0 h,生理盐水组大鼠鞘内注入10μL生理盐水,TNP-ATP组大鼠鞘内注入30 nmol/μL TNP-ATP 10μL,米诺环素组大鼠鞘内注入5 g/L米诺环素10μL,PPADS组大鼠鞘内注入10nmol/μL PPADS 10μL。注射前后0.5 h,测量大鼠PWMT。伤后72.5 h,取假伤+生理盐水组、单纯烧伤组、烧伤+LA组大鼠脊髓背角组织行免疫荧光染色观察P2X4受体和OX42受体共表达情况,行免疫组织化学染色观察P2X4受体表达并计数阳性细胞;取大鼠静脉血采用ELISA法检测血清TNF-α、IL-1β含量。未致伤2组大鼠于同前时相点行相同观测。对数据行单因素方差分析、重复测量方差分析、SNK检验、配对t检验和Bonferroni校正。结果 （1）健康+生理盐水组、假伤+生理盐水组、健康+LA组大鼠各时相点未出现活动异常现象。至伤后72.5 h,单纯烧伤组大鼠精神状态欠佳,可见背部及右后肢烧伤皮肤红肿、有水疱,出现步态不稳等现象,偶有舔咬、抓挠现象;烧伤+LA组大鼠舔咬,跛行等行为较单纯烧伤组减少,创面红肿消退较单纯烧伤组快。（2）伤前1.5 h,健康+生理盐水组、假伤+生理盐水组、单纯烧伤组、烧伤+LA组、健康+LA组大鼠PWMT组间总体比较差异无统计学意义（F=0.106,P＞0.05）。单纯烧伤组大鼠伤后各时相点PWMT均明显低于其余4组（P值均小于0.05）,烧伤+LA组大鼠伤后各时相点PWMT均明显低于健康+生理盐水组、假伤+生理盐水组和健康+LA组（P值均小于0.05）。（3）注射前0.5 h,生理盐水组、TNP-ATP组、PPADS组、米诺环素组大鼠PWMT相近,分别为15.3±0.8、15.1±1.0、15.3±0.9、15.6±1.1（F=0.343,P＞0.05）。注射后0.5 h,生理盐水组和PPADS组大鼠PWMT分别为15.2±1.2和14.8±1.0,明显低于TNP-ATP组和米诺环素组的20.8±1.4和26.3±1.0（P值均小于0.05）。生理盐水组和PPADS组大鼠注射前后PWMT相近（t值分别为0.073和-0.772,P值均大于0.05）,TNP-ATP组和米诺环素组大鼠注射后PWMT较注射前升高（t值分别为-10.180和-20.813,P值均小于0.01）。（4）伤后72.5 h,健康+生理盐水组、假伤+生理盐水组、健康+LA组大鼠少量小胶质细胞共表达P2X4受体和OX42受体,单纯烧伤组及烧伤+LA组大鼠大量小胶质细胞出现P2X4受体和OX42受体共表达。伤后72.5h,单纯烧伤组大鼠P2X4受体阳性细胞数较其余4组多（P值均小于0.05）,烧伤+LA组大鼠P2X4受体阳性细胞数明显多于健康+生理盐水组、假伤+生理盐水组和健康+LA组（P值均小于0.05）。（5）伤后72.5h,单纯烧伤组大鼠血清TNF-α和IL-1β含量均明显高于其余4组（P值均小于0.001）,烧伤+LA组大鼠血清TNF-α和IL-1β含量均明显低于健康+生理盐水组、假伤+生理盐水组和健康+LA组（P值均小于0.001）。结论 LA对重度烧伤大鼠具有明显镇痛作用,可改善机体过度炎症状态。其作用机制可能与抑制脊髓背角小胶质细胞上P2X4受体表达,减少炎症因子TNF-α、IL-1β释放有关。