木聚糖酶XYNB分子中折叠股B1和B2间的疏水作用对酶热稳定性的影响

摘要

对来源于Streptomyces olivaceoviridis的高比活木聚糖酶XYNB进行同源建模,并结合嗜热木聚糖酶氮末端芳香族氨基酸疏水作用的结构分析,设计了XYNB的T11Y定点突变,观察XYNB分子中折叠股B1和B2的疏水作用对酶的热稳定性的影响.将突变酶XYNB'在毕赤酵母中表达,表达的XYNB'经纯化后与原酶XYNB(同样经毕赤酵母表达后纯化)进行酶学性质比较,结果表明,XYNB'的耐热性比XYNB有明显的提高,但最适温度与原酶一样为60℃.另外,XYNB'的最适pH、Km值及比活性均有一定的改变.实验证实了木聚糖酶XYNB的氮端芳香族氨基酸之间的疏水相互作用与其热稳定性相关,为进一步的结构与功能研究提供了优良的基因材料.