极端嗜热菌Thermus thermophilus HB8中天冬氨酸转氨酶在大肠杆菌中的表达、纯化及酶学性质研究

摘要

为获得具有热稳定性的天冬氨酸转氨酶,从极端嗜热细菌Thermus thermophilus HB8中克隆得到天冬氨酸转氨酶基因aspC,并在大肠杆菌BL21(DE3)和Rosetta(DE3)中进行表达,发现在Rosetta(DE3)中具有较高的表达量.重组酶的最适反应pH是7.0,37℃下在pH 8～10的缓冲液中保温1 h酶活几乎不改变.重组酶反应的最适温度为75℃,酶活稳定的温度范围为25～55 ℃.重组酶在65℃时半衰期为3.5h,75℃时为2.5h.重组酶的KmKG为7.559mmol/L,Vmax KG为0.086mmol/(L·min),Km Asp为2.031mmol/L,Vmax Asp为0.024mmol/(L·min).Ca2+、Fe3+、Mn2+等金属离子对酶活性有微弱抑制作用.