融合酶CR2-GDH合成度洛西汀前体的体系与过程调控

摘要

以具有高选择性的羰基还原酶(CR2)与可实现辅酶原位循环的葡萄糖脱氢酶(GDH)通过柔性连接肽得到的融合酶CR2-GDH为生物催化剂,催化N,N-二甲基-3-酮-3-(2-噻吩)-1-丙胺(DKTP)不对称还原合成手性药物度洛西汀重要中间体(S)-N,N-二甲基-3-羟基-3-(2-噻吩)-1-丙胺((S)-DHTP).通过过程调控反应体系的pH,并进一步优化反应转速、底物同辅底物比例、温度及底物浓度,确定单批次反应条件:底物20g/L、葡萄糖40 g/L、NADP+0.1 mmol/L及酶活7 U,恒定 pH 8.4、45°C、150 r/min 反应 12 h,产物产率达到97.70％,对映体过量值(e.e.)≥99.9％.通过分批补料催化30 g/L底物的反应,产率达92.96％,进一步利用反应器放大体系至100 mL,实现40 g/L底物的转化反应,产率达到85.05％.