黏细菌抗凝溶栓双功能蛋白MF-1的纯化及其酶学性质

摘要

对黏细菌Angiococcus sp.的抗凝溶栓双活性蛋白MF-1进行纯化、鉴定并对其酶学性质进行初步研究.采用丙酮分级沉淀法、DEAE-Sepharose离子交换层析和Sephadex G-50分子筛层析对发酵液进行纯化,用SDS-PAGE和等电点聚焦电泳对其进行鉴定,并用纤维蛋白平板法和水解酪蛋白法对其酶学性质进行检测.结果表明:经过一系列的纯化步骤分离得到该蛋白相对分子质量为3.2×10~4,等电点为8.5,酶的比活力为30 761.57 U/mg,活性回收率为13.9%;溶栓活性的最适反应温度为35℃,最适反应pH为8.0;抗凝时间大于10 min,且酶活性十分稳定,在35℃下保温72 h后仍有89%活性.首次从黏细菌中分离得到具有较高抗凝和溶栓双活性的MF-1蛋白,且稳定不易失活,具有开发成为创新溶栓药物的潜力.