肺炎链球菌组氨酸激酶VicK的全长表达及其保守性分析

摘要

目的 全长表达肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae,S.pn)VicK蛋白并制备其多克隆抗体,对其进行保守性分析和亚细胞定位,为其作为抗菌药物筛选靶点提供实验依据.方法 利用分子生物学技术构建pET-28a(+)-vicK原核表达质粒,并在大肠埃希菌BL21(DE3)中进行表达,经Ni-NTA亲和纯化后,通过试剂盒检测其激酶活性.将纯化的VicK蛋白免疫Balb/C小鼠,并用ELISA和Western blot方法分别检测其多克隆抗体的效价及特异性.采用流式细胞术对VicK蛋白进行表面定位分析.结果 成功获得VicK全长蛋白,酶活性检测结果提示具有ATP激酶活性.VicK蛋白免疫小鼠获得效价达1:125000以上的多克隆抗体.Western Blot结果显示其能特异地识别1型、2型、3型、4型、6B及19F型S.pn中的VicK蛋白.流式结果表明VicK蛋白主要位于胞内.结论 获得具有ATP激酶活性的S.pn VicK全长蛋白,且该蛋白保守表达于S.pn胞内.