猪戊型肝炎病毒结构蛋白片段的表达及其在ELISA中的初步应用

摘要

为建立一种快速的猪戊型肝炎病毒抗体检测方法,根据已克隆的戊型肝炎病毒株DQ1结构蛋白基因(ORF2)的抗原性及水溶性分析,在其序列上设计一对引物,上游引物和下游引物分别带有BamHⅠ、HindⅢ酶切位点,用PCR方法扩增,获得369 bp大小的相应片段,位于ORF2 128-497 bp处.将扩增片段克隆到pET-32a构建了原核表达载体pET32a-DQ01,经测序证明该片段正确插入.将pET32a-DQ01转化BL21并诱导表达,SDS-PAGE结果显示表达蛋白大小为33 ku,Western-blot 结果表明表达的蛋白质具有生物活性,将表达蛋白作为诊断抗原,对反应条件进行优化,初步建立了ELISA诊断方法.