番鸭 (Cairina moschata ) 睾丸N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的提取及性质研究

摘要

以番鸭睾丸为材料,通过硫酸铵沉淀分级分离、DEAE-32离子交换柱层析和Sephadex G-100分子筛柱层析纯化,获得比活力为19.18 U/mg、纯化倍数为6.46倍的N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶制剂.以对-硝基苯-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖为底物,研究酶催化底物水解的反应动力学.结果表明:酶的最适pH为5.6,该酶在pH3.0～7.6区域较稳定,而在pH＞7.6能很快失活;酶的最适温度为55 ℃.当温度为80 ℃时,酶完全失活.在40 ℃以下处理30 min,酶活力保持稳定,高于45 ℃,酶稳定性较差.酶促反应动力学符合米氏双曲线方程,测得米氏常数Km为0.215 mmol/L,最大反应速度Vm为5.54 μmol/L·min.酶催化pNP-β-D-GlcNAc反应的活化能为69.05 kJ/mol.金属离子对酶的效应试验表明:高浓度的Na+和K+对酶有抑制作用;Mg2+对酶有轻度激活作用, Cu2+、Pb2+、Zn2+、Ca2+ 、Ba2+对酶活力有不同程度的抑制作用;Al3+对酶有抑制作用.