rfaE基因通过MAPKs/NF-κB信号通路对副猪嗜血杆菌LOS诱导猪肺泡巨噬细胞炎症反应中作用的研究

摘要

作者拟研究rfaE基因在副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPS)脂寡糖(LOS)刺激猪肺泡巨噬细胞(PAMs)信号通路分子的转录表达和MAPKs/ NF-κB信号通路中的作用.提取HPS SC096株及其rfaE基因缺失株(△rfaE)和互补株(c△rfaE)的LOS,分别用5和10μg HPS-LOS、△rfaE-LOS和c△rfaE-LOS刺激PAMs,分别在不同时间点收集细胞,提取RNA和蛋白质.将提取的RNA反转录成cDNA,运用RT-PCR检测TLR4、MD2、NF-κB、MAP2K2、ERK、P38和JNK的mRNA转录水平.测定提取蛋白质的浓度,利用Western blot方法检测NF-κB p65/phospho-NF-κB p65、IκBα、ERK1/2、JNK和p38/phospho-p38蛋白的表达量.结果表明用5和10μg HPS-LOS刺激细胞6、12和24 h后,TLR4、MD2、MAP2K2、ERK、P38和JNK的mRNA转录水平均显著高于△rfaE-LOS刺激细胞后的以上转录因子的mRNA水平(P＜0.05),但NF-κB的mRNA转录水平无显著差异.另外,用5和10μg HPS-LOS刺激细胞6和12 h后,IκBα蛋白的表达量显著低于△rfaE-LOS刺激细胞后的IκBα蛋白的表达量(P＜0.05),NF-κB p65和p38的磷酸化水平及ERK1/2和JNK蛋白的表达量显著高于△rfaE-LOS刺激细胞后NF-κB p65和p38的磷酸化水平及ERK1/2和JNK蛋白的表达量(P＜0.05).同时c△rfaE-LOS刺激PAMs后TLR4、MD2、MAP2K2、ERK、P38和JNK的mRNA转录水平以及NF-κB p65和p38的磷酸化水平和IκBα、ERK1/2和JNK蛋白水平能够恢复到HPS-LOS水平.以上试验结果证实在HPS-LOS诱导的炎症反应中,缺失rfaE基因后通过阻断MAPKs/ NF-κB信号通路以减轻炎症反应.