超微量DNA模板扩增鉴定绵羊早期胚胎性别体系优化

摘要

本实验旨在运用超微量胚胎DNA模板扩增SRY基因鉴定绵羊早期胚胎性别PCR体系和方法优化。根据绵羊Y染色体性别决定SRY基因的723 bp的保守序列设计引物,析因法建立巢式PCR体系,联合扩增SRY和GAPDH基因,经绵羊静脉血液和胚胎超微量DNA样本调整测试灵敏度后,切割40枚绵羊桑椹胚的少量胚细胞进行性别鉴定,并对PCR产物进行测序对比。结果显示:通过2%的琼脂糖电泳检测,除363 bp的GAPDH基因扩增条带公母羊皆出现外,只有公羊出现209 bp的雄性特异扩增条带。本实验建立的绵羊早期胚胎性别鉴定方法体系灵敏度可以达到约10 pg(3~4个细胞),对胚胎进行性别鉴定的准确率为100%。