直接竞争化学发光酶免疫法检测氟喹诺酮类药物方法的建立

摘要

建立一种能够快速检测动物源性食品中多种氟喹诺酮类药物残留的直接竞争化学发光酶免疫法.用诺氟沙星(NOR)分子修饰后制备的完全抗原免疫小鼠,获得对10种氟喹诺酮类药物具有广谱特异性的单克隆抗体,采用二因子交叉试验确定包被原与酶标抗体的最佳稀释度,通过单因素试验优化最佳包被条件、封闭液种类、竞争反应时间,从而建立反应过程的最佳条件,并对方法的灵敏度、交叉反应率、精密度进行评价.结果表明:NOR-1-OVA包被浓度0.3μg/mL,酶标抗体的稀释倍数为1:8000时为最佳稀释浓度;4°C包被过夜,封闭液为1％BSA,竞争时间为1 h时为最优反应条件.对10种氟喹诺酮类药物的灵敏度(IC50)为1.46～11.57 ng/mL,交叉反应率为12.6％～118.9％,并且与其他非喹诺酮类药物无交叉反应率;检出限为0.07～0.27 ng/mL,且批内差异和批间差异均低于10％;加标回收率为73.3％～103.1％,变异系数为1.9％～11.8％.以上结果表明,该方法可作为动物源性食品中10种FQs残留检测的常规方法.