日本血吸虫期别差异基因的Th细胞表位预测及串连多表位的原核表达

摘要

目的 表达日本血吸虫(Schistosoma japonicum)转录本组中筛选获得的候选抗原基因Th细胞表位,以备免疫试验验证,为建立大规模、高通量、快速鉴定日本血吸虫Th细胞表位的方法奠定基础.方法 应用数据挖掘技术,按照序列在不同期别转录本的数量,从Feng Liu等公布的转录本组EST序列中筛选出期别差异表达基因,选择具有完整可读框的序列作为抗原候选基因,其所编码蛋白按照有无信号肽和跨膜结构分为:信号肽跨膜结构组、非信号肽、跨膜结构组序列组.对编码蛋白应用表位预测服务器PRED-BALB/c、SYFPEIT、MHCPred、Rankpep分别对I-Ad、I-Ed、I-Ak、I-Ek型MHC分子进行表位预测.各期别各组筛选出5条最优混合预测表位.选择童虫期信号肽和跨膜结构组(mep1)和非信号肽、跨膜结构组序列组(mep2)的各5条最优15肽表位,分别设计并合成其编码核苷酸,克隆到原核表达载体pET-28a(+)进行表达、纯化.结果 筛选到不同期别差异表达基因166条.表位预测后,总共筛选出40条最优混合表位,各期别各组5条.将童虫期目的基因mep1和mep2成功合成和克隆到了表达载体pET-28a(+),目的基因mep1表达量很高,而mep2未见表达,纯化得到mep1表达蛋白.结论 成功表达了串连抗原表位,为进一步分析其免疫原性、鉴定出有效表位做好了准备.